PRÁCTICA NUMERO 1: EXTRACCIÓN Y SEPARACIÓN DE DNA
SEP SNEST DGEST
“INSTITUTO TECNOLÓGICO
DE CIUDAD ALTAMIRANO”
ALUMNO: LUIS ANGEL DAMASO ALVARADO
CARRERA: LIC. EN BIOLOGIA
VI SEMESTRE
31/03/2012
PRÁCTICA NUMERO 1: EXTRACCIÓN Y SEPARACIÓN DE DNA
RESUMEN
En este trabajo daremos a conocer los procesos para llegar a la extracción del ácido desoxirribonucleico (ADN) de un hígado , el cual fue de pollo. El cual fue muy efectivo para lograr la extaccion y la separación del DNA. Pero por supuesto se logro gracias al equipo y al trabajo realizado.
El proceso de extracción del ADN geonómico sigue ciertas pautas para su correcta purificación que son muy diferentes a los empleados en la purificación de proteínas, lo que refleja las diferencias básicas en la estructura de estos dos tipos de macromoléculas. El primer paso en la purificación del ADN por lo general consiste en homogeneizar las células y aísla los núcleos de los cuales se extrae el ADN. El medio de extracción ordinario contiene un detergente (SDS); a continuaciones le agrega solución de te para resuspender el ADN, luego los ácidos nucleicos se precipitan añadiendo etanol .Para concluir el análisis de la extracción del ADN hay que resaltar que e n este proceso ocurre una lisis celular lo cual significa que el ADN queda libre por consiguiente hay que protegerlo de las enzimas porque estas podrían degradarlo.
SUMMARY
In this paper we will present the processes to reach the extraction of deoxyribonucleic acid (DNA) of a liver, which was chicken. Which was very effective for achieving extaccion and separation of DNA. But of course was achieved thanks to the team and the work done.
The process of extraction of genomic DNA follows certain guidelines for proper purification are very different to those used in the purification of proteins, reflecting basic differences in the structure of these two types of macromolecules. The first step in the purification of DNA usually consists in homogenizing the cells and isolated nuclei from which DNA is extracted. The ordinary extraction medium containing a detergent (SDS); continuations added to solution I to resuspend the DNA, then nucleic acids were precipitated by adding ethanol. To complete the analysis of DNA extraction should be stressed that this process occurs cell lysis which means that the DNA is free so you have to protect because these enzymes can degrade.
In this paper we will present the processes to reach the extraction of deoxyribonucleic acid (DNA) of a liver, which was chicken. Which was very effective for achieving extaccion and separation of DNA. But of course was achieved thanks to the team and the work done.
The process of extraction of genomic DNA follows certain guidelines for proper purification are very different to those used in the purification of proteins, reflecting basic differences in the structure of these two types of macromolecules. The first step in the purification of DNA usually consists in homogenizing the cells and isolated nuclei from which DNA is extracted. The ordinary extraction medium containing a detergent (SDS); continuations added to solution I to resuspend the DNA, then nucleic acids were precipitated by adding ethanol. To complete the analysis of DNA extraction should be stressed that this process occurs cell lysis which means that the DNA is free so you have to protect because these enzymes can degrade.
ÍNDICE.
Antecedentes
Definición del problema.
Objetivo General
Objetivos Específicos
Justificación.
Fundamento teórico
Materiales y Métodos.
Resultados.
Conclusiones y Recomendaciones.
Fuentes consultadas
Anexos.
ANTECEDENTES
Además del agua, los carbohidratos, las proteínas y los lípidos, los seres vivos están constituidos por otras moléculas que, en menos cantidad, desempeñan funciones muy importantes.
Los ácidos nucleícos (DNA y RNA) Son biomoleculas solubles en agua que desempeñan funciones diversas. Son moléculas complejas producidas por las células vivas; son esenciales para todos los organismos vivos. Estas moléculas gobiernan el desarrollo del cuerpo y sus características específicas, ya que proporcionan la información hereditaria y ponen en funcionamiento la producción de proteínas.
La extracción de ADN de los tejidos de las plantas, a diferencia de aislamiento de ADN de tejidos de mamíferos, sigue siendo difícil debido a la presencia de una pared celular rígida que rodea las células vegetales. Actualmente se utilizan métodos exigen necesariamente una laboriosa trituración mecánica paso, necesario para interrumpir la pared celular para la liberación de ADN. El campo de la biología molecular de plantas es, por lo tanto, en una situación de desventaja, especialmente cuando un sistema automatizado de alto rendimiento para el sistema de aislamiento de PCR-Ready se requiere el ADN genómico en la genética de poblaciones, la identificación de las especies, la diversidad biológica de investigación, la selección de detección, de control de los alimentos y la biotecnología vegetal. QIAGEN GmbH ha desarrollado un 96-así moler método (MagAttract 96 Planta kit), pero se requiere de un molino mezclador especial, un paso centrifugación y, en consecuencia, no está plenamente automatable
DEFINICION DEL PROBLEMA
El proceso de extracción del DNA es una técnica muy importante para los biólogos que deben poner en práctica, esta consiste en separar el DNA de cualquier tipo de tejido ya sea vegetal o animal, en este caso se trabajo con tejido animal (hígado de pollo), para esto se necesitan ciertas sustancias para lograr la separación y de material por supuesto. Para la separación de este tejido solo se tiene que cortar una pequeña porción de membrana del hígado, solo una pequeña porción se necesita para la separación y extracción.
OBJETIVO GENERAL
Extraer y separar DNA Y RNA de tejido animal (hígado de pollo), para observar sus características.
JUSTIFICACIÓN
El objetivo de esta práctica es conocer como separar y extraer DNA a partir de un tejido animal (hígado de pollo), siguiendo una metodología dada por el profesor como se menciono en la parte anterior un biólogo debe como conocer y aprender cómo se da la extracción y la separación del DNA para que en un futuro determinado se llegara a presentar esto, nosotros ya sabemos de que se trata este trabajo.
FUNDAMENTO TEÓRICO
Como ya mencionado en la parte anterior la metodología o el manual del trabajo nos fue entregado de manera individual, pero se trabajo de manera en equipo, el manual del trabajo nos brinda la siguiente metodología o sea todos los puntos a conocer para lograr el objetivo de la practica:
A) Rompimiento de membranas y pared celulares.
Toma una muestra del tejido (5 gr Aprox) que hayas eligido y homogenízalo, es decir muelelo con el mortero, si el tejido es muy duro, si el tejido es muy duro licualo en seco.
B) Digestion
Coloca tu muestra molida (1 gr aprox), en un tubo de eppendorf de 1 ml y agrégale el Buffer de extracion (Tris- HCL 0.05 M, EDTA, 0,02 M, NaCl 0.35 M, Urea 7 M) a temperatura de cuarto (500 ul aprox).
Cuando hayas agregado el Buffer de extracción a tu muestra, agítala e incúbala por 10 minutos con agitación esporádica.
C) Separación de Proteínas, Carbohidratos y Lípidos
A la mezcla que tienes en tu tubo de ensayo agrégale 500 ul. de Fenol/Cloroformo/Isopropanol frio usa guantes y no inhales los vapores.
Agita vigorosamente en Vortex, cuidando que no se tire el contenido del tubo, deja reposar a temperatura ambiente por 5 min.
Extrae la fase acuosa (500 ul.) con una micropipeta, si no se separan las fases centrifuga a 3000 rpm por 10 min, ten cuidado de equilibrar la centrifuga.
Extrae la fase acuosa superior una vez centrifugada.
D) Precipitación de Ácidos nucleicos DNA y RNA
A la fase acuosa que extrae (500 ul), colocala en un tubo de eppendorf limpio y agrégale 400 ul de etanol (100 %) frio y 75 ul de NaCl 3 M. Mezcla por inversión, suave y observa como se precipita el DNA.
D) Recuperacion de la pastilla.
Centrifuga tu tubo por 5 min a 3000 rpm, recoge la pastilla del fondo del tubo.
E) Resuspension.
Resuspende tu pastilla de DNA en 5 ml de agua destilada estéril.
MATERIALES Y MÉTODOS.
Los materiales que se ocuparon para realizar la practica son los siguientes:
*Tubos de centifruga 1ml
*Tubos de ensayo de 5ml
*Centrifuga
*MicroPipetas de 1000 y 200 ul
*Agua Destilada estéril (20 ml para todos)
*Etanol al 100% frio (20 ml para todos)
*NaCl 3M
*Buffer de extracción de ADN (Urea, Nacl, EDTA, (20 ml para todos)
*Fenol/Cloroformo/Isopranol frió. (20 ml para todos)
*Mortero y pistilo
*Aguacate, cacahuate, hojas, carne, hígado, sangre.
*Papel aluminio
*Ceenpack
*Guantes
En cuanto al método que nos basamos en realizar fue con la ayuda del manual que nos proporciono el profesor para dicha practica.
En cuanto al método que nos basamos en realizar fue con la ayuda del manual que nos proporciono el profesor para dicha practica.
RESULTADOS
A) Rompimiento de membranas y pared celulares.
Toma una muestra del tejido (5 gr Aprox) que hayas eligido y homogenízalo, es decir muelelo con el mortero, si el tejido es muy duro, si el tejido es muy duro licualo en seco.
B) Digestion
Coloca tu muestra molida (1 gr aprox), en un tubo de eppendorf de 1 ml y agrégale el Buffer de extracion (Tris- HCL 0.05 M, EDTA, 0,02 M, NaCl 0.35 M, Urea 7 M) a temperatura de cuarto (500 ul aprox).
Cuando hayas agregado el Buffer de extracción a tu muestra, agítala e incúbala por 10 minutos con agitación esporádica.
C) Separación de Proteínas, Carbohidratos y Lípidos
A la mezcla que tienes en tu tubo de ensayo agrégale 500 ul. de Fenol/Cloroformo/Isopropanol frio usa guantes y no inhales los vapores.
Agita vigorosamente en Vortex, cuidando que no se tire el contenido del tubo, deja reposar a temperatura ambiente por 5 min.
Extrae la fase acuosa (500 ul.) con una micropipeta, si no se separan las fases centrifuga a 3000 rpm por 10 min, ten cuidado de equilibrar la centrifuga.
Extrae la fase acuosa superior una vez centrifugada.
D) Precipitación de Ácidos nucleicos DNA y RNA
A la fase acuosa que extrae (500 ul), colocala en un tubo de eppendorf limpio y agrégale 400 ul de etanol (100 %) frio y 75 ul de NaCl 3 M. Mezcla por inversión, suave y observa como se precipita el DNA.
D) Recuperacion de la pastilla.
Centrifuga tu tubo por 5 min a 3000 rpm, recoge la pastilla del fondo del tubo.
E) Resuspension.
Resuspende tu pastilla de DNA en 5 ml de agua destilada estéril.
CONCLUSIONES
Dentro de las conclusiones se puede decir que se lograron los objetivos de la práctica, la separación ya la extracción del DNA a partir de tejido animal se logro correctamente, ahora esto aun no ha terminado completamente aun siguen algunos procesos como la purificación del DNA, etc. Para observar con más claridad las características del DNA, algunas recomendaciones son el uso adecuado en esta práctica, se necesita de mucho cuidado y poner atención en los procedimientos ya que cualquier error podríamos perder todo nuestro trabjo realizado.
BIBLIOGRAFIA
· Gerald karp. Biología celular y molecular. ED McGrawHill 1998. Pág. 727-730.
· Biología Molecular y Herencia. Robert A. Wallace, Jack L. King, Gerald P. Sanders., 1a edición. Editorial
· Trillas. México 1991: página 97, 98.
· http://www.educ.ar/educar/tecnologia-del-adn-recombinante.html
· http://www.geneticaycancer.es/doc.phpop=molecular&ap=tecnicas_molecular&id=8
ANEXOS
CUESTIONARIO
1. ¿Porque el DNA en solución se precipita en presencia de un alcohol frió?
Lo que queremos estudiar es totalmente el DNA, asi que el alcohol permite la separación de complejos que a nosotros no nos interesa como son proteínas y carbohidratos.
2.¿Como separamos de nuestra muestra el DNA del RNA?
Por centrifugación.
3.¿Cuál es la función del Cloroformo?
Separar de Proteínas, Carbohidratos y Lípidos.
4.¿Cómo podrías cuantificar la cantidad de DNA de tu muestra?
Por medio de la PCR.
5. ¿Cuál es su función y la importancia del DNA en los organismos?
El DNA es importante por en el contiene el material genético, en el contiene toda la información, todas las características que presentamos en nuestro organismo. Por eso es importante saber cómo se guarda y se almacena el material genético.
Y posteriormente conocer como se transmite de generación en generación, es decir de especie a especie y gracias a esas características las especies han venido evolucionando de generación a generación.
Las funciones del DNA, son el almacenamiento del material genético, codifica proteínas, se replica y controla el metabolismo celular.
Plant extracts are a class of plant-derived active materials, which exert one or multiple biological functions such as growth promotion, antioxidant, anti-virus, and immunological enhancement etc. animal extraction
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